NCI-H209 人小細胞肺癌細胞（STR鑒定）

簡介：該細胞由Gazdar AF及其同事于1979年從一名小細胞肺癌患者的骨髓轉移灶中分離建立（也稱為 H-209），該骨髓標本的獲取先于患者的治療。該細胞是一種典型的小細胞性肺癌細胞，表達較高水平的4種生化標志：神經(jīng)特異性烯醇、肌酸激酶腦型同工酶、左旋/多巴脫羧酶、鈴蟾肽樣免疫活性。c-myc DNA序列沒有擴增；未發(fā)現(xiàn)大的結構DNA的異常；該細胞合成與正常肺相當量的p53 mRNA。該細胞以聚集體的形式懸浮生長，只有聚集體中的細胞是有活力的，但是細胞活率無法估計，一般培養(yǎng)基中含有大量的細胞碎片。

細胞特性：

1） 來源：男 小細胞肺癌患者的骨髓中提取。

2） 形態(tài)：球形成聚集體，懸浮生長，有少數(shù)細胞疏松貼壁

3） 含量：>1x106 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

NCI-H209 人小細胞肺癌細胞（STR鑒定）

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