土壤脲酶（Solid-Urease，S-UE）測定試劑盒說明書

                                         微量法100管/48樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機物質(zhì)含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。

測定原理：

利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH₃-N。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：甲苯2mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1瓶，臨用前加入9mL蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體22mL×1瓶，4℃保存；

試劑四A液：液體×1支，4℃保存；試劑四B液：液體×1瓶，4℃保存；臨用前將A液倒入B液中混合，待用；用不完的試劑4℃保存一周；

試劑五：液體2mL×1瓶，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測定步驟：

1 、培養(yǎng)

振蕩混勻，室溫放置15min

混勻，放入37℃水浴培養(yǎng)24h后，10000g 25℃離心10min，取上清液。

2、將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸餾水）。

3、測氨量（在微量石英比色皿或96孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫放置20min

混勻，于578nm處，蒸餾水調(diào)零，讀吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

脲酶活力計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0915x +0.0373；x為標準品濃度（μg/mL），y為吸光值A。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

脲酶活力（μg/d/g 土樣）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷W÷T =656×(ΔA -0.0373)

10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時間，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.04575x +0.0373；x為標準品濃度（μg/mL），y為吸光值A。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μg NH₃-N定義為一個酶活力單位。

脲酶活力（μg/d /g 土樣）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷W÷T =1312×(ΔA -0.0373)

10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時間，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。