土壤過(guò)氧化氫酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                      微量法100管/48樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：                           

S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類(lèi)，在H₂O₂清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測(cè)定原理：

H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即可反應(yīng)S-CAT活性的高低。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸餾水

試劑組成和配制：

試劑一：液體300μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入29.7mL蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）；

試劑三：液體3mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

測(cè)定步驟：

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm，蒸餾水調(diào)零。

2、   測(cè)定前務(wù)必準(zhǔn)備96孔UV板一塊（UV板不是普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于340nm務(wù)必使用UV板）。

3、   加樣表

25℃振蕩培養(yǎng) 20min

混勻8000g，25℃離心5min，取180uL上清

混勻， 240nm處記錄各管吸光值A。

注意：每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管，無(wú)土管只要做一管。

S-CAT活性計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g風(fēng)干土樣催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A無(wú)土管-A測(cè)定管+A無(wú)基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×10⁶]÷W÷T=16.5×（A無(wú)土管-A測(cè)定管+A無(wú)基質(zhì)管）

V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10^-4 L；ε：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

單位的定義：每天每g風(fēng)干土樣催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A無(wú)土管-A測(cè)定管+A無(wú)基質(zhì)管)×V反總÷（ε×d）×10⁶]÷W÷T=33×（A無(wú)土管－A測(cè)定管+A無(wú)基質(zhì)管）

V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10^-4 L；ε：過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm； T：反應(yīng)時(shí)間，20 min=1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。