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果糖(fructose ,F(xiàn)T)含量試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/5/22      點(diǎn)擊次數(shù):408

果糖fructose ,FT含量試劑盒說明書

                                微量法100/96

 

   意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

果糖是一種最為常見的己酮糖,是葡萄糖的同分異構(gòu)體,以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中,能與葡萄糖結(jié)合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。

 

測定原理:

果糖與間苯二酚反應(yīng),生成有色物質(zhì),在480nm下有特征吸收峰。

 

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水

 

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100ml×1瓶,4保存;

試劑一:1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液10mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體 25ml×1瓶,4保存;

試劑三:液體 8ml×1瓶, 4避光保存;

試劑四:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。

 

果糖提?。?/span>

稱取0.1~0.2g樣本,常溫研碎;加入0.5mL提取液,適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中;置于80水浴鍋中10min(蓋緊,以防止水分散失),振蕩3~5次,冷卻后,4000g,25℃離心10min,取上清;加入少量(約2mg)試劑四,80脫色30min(蓋緊,以防止水分散失);再加入0.5mL提取液,4000g,25℃離心10min,取上清液測定。

 

測定步驟:

分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至480nm,蒸餾水調(diào)零。

1、  樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):

試劑(μL

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

樣本



30

試劑一


30


蒸餾水

30



試劑二

210

210

210

試劑三

60

60

60

混勻,95水浴反應(yīng)30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值,空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管分別記為A1A2A3。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

 

 

果糖含量計(jì)算:

1、果糖含量(mg/mg prot=C標(biāo)準(zhǔn)管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷V1×Cpr= (A3-A1)÷A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測定蛋白濃度。

2、果糖含量(mg/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.03mL;V2:加入提取液體積,1mL Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g。

注意:Z低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot


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